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精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)可以常规检测所有精子标本的存活率，通过染料拒染法来鉴别细胞膜完整的精子，从而得出活精子的百分率，该染色液由伊红染色液、苯胺黑染色液组成，利用染料拒染原理，即相关基于损伤的细胞膜，如在非活的(死)细胞上的膜，允许非透过膜性染料可进入膜内染色；而活细胞的细胞膜能够抗拒染料进入，产生拒染现象，不着色。

• 精液标本一旦液化应立即检测精子存活率，最好在30min内使用，在任何情况下都不能超过1h，以免因脱水或温度变化导致精子失活而使染色检测结果不准。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 充分混匀精液标本：在取精液样本用于评估前，要在原取精容器中充分混匀精液，注意过程中不要因剧烈震荡而产生气泡。
  
• 取洁净小试管，滴加新鲜精液1滴和精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)1～2滴，放置30～60s。
  
• 重复取样前，再次混匀精液标本，取精液与精子活体染色液(伊红-苯胺黑法)混合，如上述步骤2处理。
  
• 滴加上述精液-伊红-苯胺黑染色液1滴于载玻片上，制成涂片。
  
• 晾干、镜检，油镜下观察，未着色的活精子为白色，死精子呈红色，背景呈黑色。
  
• 计数200个精子，计算未着色(活精子)占200个精子的百分率。